prou
Izdelki
N-glikanski komplet HCP0031A Prikazana slika
  • N-glikanski komplet HCP0031A

N-glikanski komplet


Kataloška št.: HCP0031A

Paket: 5T/24T/96T

Ta dokument vsebuje informacije o splošni negi in uporabi N-glikanskega kompleta za hitro encimsko sproščanje in hitro označevanje N-glikanov.

Opis izdelka

Podatki o izdelku

Opis izdelka

Ta dokument vsebuje informacije o splošni negi in uporabi N-glikanskega kompleta za hitro encimsko sproščanje in hitro označevanje N-glikanov.Ta protokol je potrjen z uporabo monoklonskih protiteles, preizkušen pa je bil tudi za širok spekter drugih N-povezanih glikoproteinov.Priporočamo, da uporabnik potrdi encimsko sproščanje za svoj vzorec.


  • Prejšnja:
  • Naslednji:

  • Komponente

    N-Glycan Kit (24T)

    Modul

    Ckomponenta

    HCP0031A

     

    Modul deglikozilacije

    HCP0031A-1

    IgG

    1,2 mg

    PNGase F

    45 µL

    medpomnilnik PNGase F

    0,5 ml

    Površinsko aktivna snov

    1,2 mg * 6

    Modul za označevanje

    HCP0031A-2

    MS reagent v prahu

    8,2 mg * 3

    Brezvodni DMF

    1 ml

    Modul za čiščenje

    HCP0031A-3

    Elucijska plošča (96 vdolbinic)

    1 kos

    Elucijski pufer

    5 ml* 1

    Razredčilo vzorca

    5 ml* 1

     

    Modul za zbiranje vzorcev

    HCP0031A-4

    Trakovi z 8 tubami (200 μl)

    100 kosov

    Trakovi z 8 kapicami

    100 kosov

    Zbirna plošča (96 vdolbinic)

    1 kos

    Pladenj za odpadke

    1 kos

    Protokol

    Uporabnik mora pripraviti spodnje reagente in pripomočke, preden začnete (na primer en vzorec IgG):

    (1) 0,85 % Nacl, 100 µL;acetonitril (stopnja LC-MS);ultračista voda;

    (2) 15/85 = ultračista voda/raztopina acetonitrila (v/v), 2 ml;1/9/90=mravljinčna kislina/ultračista voda/acetonitril (v/v), 20 mL; 50 mM amonijevega formata, PH=4,4, 500 mL;

    (3) SPE vakuumska črpalka;procesor negativnega tlaka ali procesor pozitivnega tlaka s ploščo s 96 jamicami;Grelni modul ali kovinska kopel (90 ℃ in 50 ℃);vrtinčni mešalnik;pipeta.

     

    Korak 1: Hitra deglikozilacija

    (1) Vzorec IgG razredčite z 0,85 % Nacl, da dobite končno koncentracijo IgG pri 2 mg/mL.

    (2) Pufer PNGase F: razredčite 1 vialo s površinsko aktivno snovjo (1,2 mg/3,6 mg) z (24 μL/72 μL) pufrom PNGase F, premešajte in shranite pri sobni temperaturi (to raztopino morate pripraviti pred uporabo).

    (3) Dodajte 20 μL raztopine IgG v 200 μL reakcijsko epruveto, dodajte 3 μL pufra PNGase F, pipetirajte gor in dol za mešanje in nato dodajte 3,3 μL ultračiste vode, aspirirajte in odmerite za mešanje.

    (4) Dodajte vso zgoraj navedeno raztopino v grelni modul pri 90 ℃, 3 minute, jo denaturirajte, nato jo odstranite iz grelnega modula in ohladite 3 minute na sobni temperaturi.

    (5) Dodajte 1,2 μL PNGase F, aspirirajte in odmerite, da premešate, segrejte 50 ℃, 5 minut z grelnim modulom.Uporabnik lahko med čakanjem pripravi reagent za označevanje.

    (6) Vzemite ga iz grelnega modula in nato ohlajajte 3 minute pri sobni temperaturi.

     

    Korak 2. Hitro označevanje glikozilaminov

    (1) Raztopina reagenta za označevanje: razredčite eno vialo reagenta za označevanje (8,2 mg/24,6 m) z brezvodnim DMF (60,13 μL/180,4 μL), to raztopino je treba pripraviti pred uporabo), aspirirajte in odmerite 5- do 10-krat, da zagotovite je reagent popolnoma raztopljen.

    (2) Dodajte 6 μL raztopine reagenta za označevanje v reakcijsko epruveto, aspirirajte in odmerite 5- do 10-krat, da zagotovite mešanje, nato pa pustite, da se reakcija označevanja nadaljuje pri sobni

    temperaturi 5 minut.

    (3) Dodajte 179 μL acetonitrila, premešajte za naslednji korak.

     

    3. korak: Čiščenje Z oznako Glycosylarudniki

    (1) Nastavite procesor negativnega tlaka ali procesor pozitivnega tlaka in elucijsko ploščo s 96 vdolbinicami.

    (2) Kondicionirajte vdolbinice: dodajte 200 μL ultračiste vode na elucijsko ploščo, da kondicionirate vdolbinice, zberite odpadke s pladnjem za odpadke.

    (3) Uravnotežite vdolbinice: dodajte 200 μL 15/85 raztopine vode/acetonitrila (v/v), da uravnotežite vdolbinice, zberite odpadke na pladnju za odpadke.

    (4 ) Nalaganje vzorca: Naložite vzorce, razredčene z acetonitrilom, in zberite odpadke na pladnju za odpadke.

    (5) Jamice dvakrat sperite s 600 μL 1/9/90 mravljinčne kisline/ultračiste vode/acetonitrila (v/v) in zberite odpadke na pladnju za odpadke.

    (6) Odstranite pladenj za odpadke in ga zamenjajte z zbiralno ploščo.

    (7) Celico sperite s 50 μL elucijskega pufra, eluirajte glikane na zbirno ploščo in ponovite ta korak.

    (8) Dodajte 200 μL razredčila za vzorec, premešajte.

    Korak 4. HILIC-FLR

    (1) Kromatografska kolona: ACQUITY UPLC® Glycan BEH Amide, 130 Å, 1,7 μm, 2,1 x 150 mm (vodni del #186004742).

    (2) Temperatura kolone: ​​60 °C

    (3) Tekoča faza A: 50 mM raztopina amonijevega formata (priporočena je stopnja LC-MS), pH=4,4.

    (4) Tekoča faza B: 100 % acetonitril (stopnja LC-MS jepriporočljivo).

    (5) Hitrost pretoka: 0,4 ml/min;

    (6) Gradient:

    Čas(min)

    Hitrost pretoka (mL/min)

    %A

    %B

    Krivulja

    0

    0,4

    25

    75

    6

    35

    0,4

    46

    54

    6

    36.5

    0,2

    100

    0

    6

    39.5

    0,2

    100

    0

    6

    43. 1

    0,2

    25

    75

    6

    47.6

    0,4

    25

    75

    6

    55

    0,4

    25

    75

    6

    (7) Valovne dolžine FLR: EX 265/EM 425 nm

    (8)Frekvenca vzorčenja FLR: 2 Hz

    (9) Volumen injekcije: 10 μL

    Upoštevajte, da zgornji parametri temeljijo na stroju, opremljenem z »ACQUITY® RDa«LCMS, lahko uporabnik ustrezno prilagodi parameter na drugi opremi.

     

    Storage

    Reagent

    Shranjevanje

    IgG

    2-8 ℃, 12 mesecev

    PNGase F

    -25 ~ – 15 ℃℃, 12 mesecev, izogibajte se

    cikle zamrzovanja/odmrzovanja

    medpomnilnik PNGase F

    2-8 ℃, 12 mesecev

    Površinsko aktivna snov

    Sobna temperatura, 12 mesecev

    MS reagent v prahu

    2-8 ℃, 12 mesecev, hraniti v temi

    Brezvodni DMF

    Sobna temperatura, 12 mesecev

    Elucijski pufer

    Sobna temperatura, 12 mesecev

    Razredčilo vzorca

    Sobna temperatura, 12 mesecev

    elucijska plošča s 96 vdolbinicami

    Sobna temperatura, po odprtju je treba neuporabljeno vdolbinico zapreti s plastično parafinsko folijo in sušilno sredstvo hraniti pri sobni temperaturi

    200 μL trakovi z 8 epruvetami, trakovi iz

    8 pokrovčkov, zbiralna plošča z 96 jamicami, pladenj za odpadke

    Sobna temperatura, zbiranje vdolbinic 96

    ploščo zaprite in sušilno sredstvo hranite pri sobni temperaturi

     

    Opombe

    Zaradi vaše varnosti in zdravja nosite laboratorijski plašč in rokavice.

    Vsakič uporabite čiste nasvete

    Za shranjevanje in uporabo reagentov upoštevajte navodila

     

    Tukaj napišite svoje sporočilo in nam ga pošljite