RT-LAMP Fluorenscent Master Mix
Ta izdelek vsebuje reakcijski pufer, mešanico encimov RT (Bst DNA polimeraza in toplotno odporna reverzna transkriptaza), liofilizirana zaščitna sredstva influorescenčnasestavine barvila.Reakcijski pufer vsebuje Mg2+, dNTP in druge potrebne komponente za pomnoževanje.Za uporabo samo zmešajte pufer, reakcijski encim, fluorescentno barvilo, temeljni premaz in dodajte predlogo, dodajanje liofiliziranega zaščitnega sredstva pa lahko neposredno uporabite.Priključili so ga na liofilizator in liofilizirali, ob uporabi pa so dodajali samo primerje in predloge.Ta reagent ima visoko učinkovitost pomnoževanja in občutljivost.
Komponenta
Komponenta | HCB5205A-01 | HCB5205A-02 | HCB5205A-03 |
Medpomnilnik za ojačanje, ki ga posreduje zanka | 1,2 ml | 4 ml × 3 | 12 ml × 10 |
Mešanica RT-encimov | 245 μL | 2,45 ml | 2,45 ml × 10 |
Liofilizirano zaščitno sredstvo | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
25× Barva | 192 μL | 0,96 ml × 2 | 0,96 ml × 20 |
Aplikacije
Za izotermno pomnoževanje DNA ali RNA.
Pogoji shranjevanja
Prevažano s suhim ledom, shranjeno pri -25 ~ -15 ℃.Izogibajte se pogostemu zamrzovanju-odmrzovanju, izdelek je uporaben 12 mesecev.
Protokol
1.Reakcijski pufer, ki ga boste uporabili, odmrznite pri sobni temperaturi.Epruvete na kratko pretresite ali večkrat obrnite, da se temeljito premešajo, nato centrifugirajte, da zberete tekočino na dnu epruvete.
2.Priprava reakcijskega sistema.Ta reagent je mogoče pripraviti v dveh reakcijskih sistemih, tekoči reakcijski mešanici in liofilizirani sistemski mešanici.
1) Pripravite tekočo reakcijsko mešanico
Komponenta | Glasnost |
Medpomnilnik za ojačanje, ki ga posreduje zanka | 12,5 μL |
25× Barva | 2 μL |
Mešanica RT-encimov | 2,55 μl |
10 × Primerna mešanicaa | 5 μL |
Predloge DNA/RNA b | × μl |
Voda brez nukleaze | Do 50 μl |
2) Mešanica sistema za liofilizacijo
① Pripravite liofilizirano mešanico
Komponenta | Glasnost |
Medpomnilnik za ojačanje, ki ga posreduje zanka | 12,5 μL |
Liofilizirano zaščitno sredstvo | 20 μL |
25× Barva | 2 μL |
Mešanica RT-encimov | 2,55 μl |
Voda brez nukleaze | Do 50 μl |
② Liofilizacija: Pripravljena mešanica je bila liofilizirana v 50 μL sistemu
③ Pripravite reakcijsko mešanico
Komponenta | Glasnost |
Liofilizirana mešanica | 1 kos |
10 × Primerna mešanicaa | 5 μL |
Predloge DNA/RNA b | × μl |
Voda brez nukleaze | Do 50 μl |
Opombe:
1) a.10 × mešanica temeljnih premazov: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (vodotopni) se priporoča za templ.
3)Reakcija pomnoževanja: Nastavite naslednji program na instrumentu za fluorescentno PCR (npr. ABI7500 itd.):
Temperatura | Čas | Krogi |
65 ℃ | 60 sekund *zberite fluorescenco FAM | 30 |
Opombe
1.Na dnu pufrske cevi se lahko pojavi sol, na kratko premešajte ali večkrat obrnite epruvete, da temeljito premešate pri sobni temperaturi.
2.Reakcijsko temperaturo je mogoče optimizirati med 62 ℃ in 68 ℃ glede na stanje primerjev.
3.Poskus mora biti standardiziran, vključno s pripravo reakcijskega sistema, liofilizacijo ter procesom obdelave in dodajanja vzorca;
4.Da bi se izognili kontaminaciji, je priporočljivo, da pripravite reakcijski sistem v ultra čisti klopi, v drugih. Dodajte predloge v dimno napo v prostoru, da preprečite lažne pozitivne motnje.