One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Kataloška št.: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) je komplet za hitro odkrivanje RT-qPCR na osnovi sonde, primeren za kvantitativno PCR v enem ali več pleksih z uporabo RNA kot predloge (kot je virus RNA).Ta izdelek uporablja novo generacijo s protitelesi spremenjene Taq DNA polimeraze in enostopenjsko namensko reverzno transkriptazo z optimiziranim pufrom za hitro pomnoževanje, ki ima večjo hitrost pomnoževanja, večjo učinkovitost pomnoževanja in specifičnost.Podpira uravnoteženo ojačanje tako v enem pleksu kot v multipleksu vzorcev z nizko in visoko koncentracijo v kratkem času.
Komponente
1. 5 × RT-qPCR pufer (U+)
2. Mešanica encimov (U+)
Opombe:
a.5 × RT-qPCR pufer (U+) vključuje dNTP in Mg2+;
b.Mešanica encimov (U+) vključuje reverzno transkriptazo, Hot Start Taq DNA polimerazo, inhibitor RNaze in UDG;
c.Uporabite konice brez RNaze, EP epruvete itd.
Pred uporabo temeljito premešajte pufer 5×RT-qPCR (U+).Če se po odtajanju pojavi kakšna oborina, počakajte, da se pufer vrne na sobno temperaturo, premešajte in raztopite ter jih nato uporabite kot običajno.
Pogoji shranjevanja
Izdelek je dobavljen s suhim ledom in ga je mogoče hraniti pri -25 ~ -15 ℃ 1 leto.
Navodila
1. Reakcija Sistem
| Komponente | Prostornina (20 μL reakcija) |
| 2 × RT-qPCR medpomnilnik | 4 μL |
| Mešanica encimov (U+) | 0,8 μL |
| Primer Naprej | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Sonda TaqMan | 0,05~0,25 μM |
| Predloga | X μL |
| Voda brez RNaze | do 25 μL |
Opombe: Reakcijski volumen je 10-50 μL.
2. Kolesarski protokol (Sstandard)
| Cikel korak | Temp. | Čas | Cikli |
| Povratni prepis | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Začetna denaturacija | 95 ℃ | 30 sekund | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 10 sekund | 45 |
| Žarjenje/podaljšanje | 60 ℃ | 30 sekund |
| Kolesarski protokol (Hitro) Cikel korak |
Temp. |
Čas |
Cikli |
| Povratni prepis | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Začetna denaturacija | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Žarjenje/podaljšanje | 60 ℃ | 10 s |
Opombe:
a.Temperatura povratne transkripcije je med 50 ℃ in 60 ℃, zvišanje temperature pomaga ojačati kompleksne strukture in predloge z visoko vsebino CG;
b.Optimalno temperaturo žarjenja je treba prilagoditi glede na vrednost Tm primerja in izbrati najkrajši čas za zbiranje fluorescenčnega signala na podlagi instrumenta PCR v realnem času.
Opombe
Prosimo, da nosite potrebno osebno zaščitno opremo, kot je laboratorijski plašč in rokavice, da zagotovite svoje zdravje in varnost!
