Bst 2.0 DNA polimeraza (brez glicerola)
Bst DNA polimeraza V2 izhaja iz DNA polimeraze I bakterije Bacillus stearothermophilus, ki ima 5′→3′ DNA polimerazno aktivnost in močno nadomestno aktivnost verige, nima pa 5′→3' eksonukleazne aktivnosti.Bst DNA polimeraza V2 je idealna za premik verige, izotermno pomnoževanje LAMP (izotermno pomnoževanje, posredovano z zanko) in hitro sekvenciranje.
Komponente
| Komponenta | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraza V2 (brez glicerola) (8U/μl) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 medpomnilnik | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Aplikacije
1. LAMP izotermno ojačanje
2. Reakcija premestitve enojne verige DNA
3. Visoko sekvenciranje genov GC
4.DNA sekvenciranje nanogramske ravni.
Pogoj shranjevanja
Prevoz pod 0°C in skladiščenje pri -25°C~-15°C.
Definicija enote
Ena enota je definirana kot količina encima, ki vključi 25 nmol dNTP v material, netopen v kislini, v 30 minutah pri 65 °C.
Kontrola kakovosti
1.Test čistosti beljakovin (SDS-PAGE):Čistost Bst DNA polimeraze V2 je ≥99 % določena z analizo SDS-PAGE z detekcijo Coomassie Blue.
2.Aktivnost eksonukleaze:Inkubacija 50 μL reakcije, ki vsebuje najmanj 8 U Bst DNA polimeraze V2 z 1 μg λ -Hind Ⅲ prebavljene DNA 16 ur pri 37 ℃, ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
3.Dejavnost Nickase:Inkubacija 50 μL reakcije, ki vsebuje najmanj 8 U Bst DNA polimeraze V2 z 1 μg pBR322 DNA 16 ur pri 37 °C, ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
4.Aktivnost RNaze:Inkubacija 50 μL reakcije, ki vsebuje najmanj 8 U Bst DNA polimeraze V2 z 1,6 μg MS2 RNA 16 ur pri 37 °C, ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
5.E. coli DNA:120 U Bst DNA polimeraze V2 pregledamo na prisotnost genomske DNA E. coli z uporabo TaqMan qPCR s primerji, specifičnimi za lokus 16S rRNA E. coli.Kontaminacija genomske DNK E. coli je ≤1 kopija.
Reakcija LAMP
| Komponente | 25μL |
| 10×HC Bst V2 medpomnilnik | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10 mM vsak) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 zelena (25×)a | 1,0 μL |
| Primerna mešanicab | 6 μL |
| Bst DNA polimeraza V2 (brez glicerola) (8 U/uL) | 1 μL |
| Predloga | × μl |
| ddH₂O | Do 25 μL |
Opombe:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Glede na eksperimentalne potrebe se lahko kot nadomestki uporabljajo druga barvila;
2) b.Primerna mešanica: pridobljena z mešanjem 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB in drugih volumnov.
Reakcija in stanje
1 × pufer HC Bst V2, temperatura inkubacije je med 60 °C in 65 °C.
Toplotna inaktivacija
80 °C, 20 minut
