Reagent za sproščanje vzorca
Reagent za sproščanje vzorca je za diagnostične scenarije molekularne POCT.Za dva sistema neposrednega pomnoževanja LAMP in neposrednega pomnoževanja PCR ekstrakcija nukleinske kisline ni potrebna.Surovi lizat vzorca je mogoče neposredno pomnožiti, ciljni gen je mogoče natančno zaznati, čas zaznave vzorca je mogoče dodatno skrajšati, kar popolnoma ustreza zahtevam uporabe molekularne POCT.Primeren je za brise nosu, grla in druge vrste vzorcev.Obdelane vzorce je mogoče neposredno uporabiti za kvantitativno detekcijo PCR ali LAMP s fluorescenco v realnem času, enake rezultate kot z običajnimi metodami ekstrakcije pa je mogoče doseči brez zapletenih operacij ekstrakcije nukleinske kisline.
Pogoji shranjevanja
Transport in shranjevanje pri sobni temperaturi.
Kontrola kakovosti
Funkcionalna detekcija – kvantitativni qPCR: 800 μl sistem reagenta za sproščanje vzorca je bil pomnožen
s 1000 kopijami novega psevdovirusa, enim vzorcem brisa nosu, kar je povzročilo podobne pomnoževalne krivulje inVrednosti ΔCt znotraj ± 0,5 Ct.
Eksperimentalni postopekres
1. Vzemite 800 μl reagenta za sproščanje vzorca in razpršite raztopino za lizo v 1,5 ml epruveto za vzorčenje
2. Vzemite nosni bris ali bris grla z brisom; postopek vzorčenja nosnega brisa: vzemite sterilni bris in ga vstavite v nosnice, počasi pomaknite do približno 1,5 cm globoko, nežno zavrtite 4-krat proti nosni sluznici več kot 15 sekund , nato ponovite isto operacijo na drugi nosni votlini z istim brisom. Postopek odvzema brisa žrela: vzemite sterilno palčko in 3-krat nežno, hitro obrišite žrelne mandlje in zadnjo steno žrela.
3.Bris takoj položite v cev za vzorčenje.Glavo brisa je treba vrteti in mešati v raztopini za shranjevanje vsaj 30 sekund, da se zagotovi popolna eluacija vzorca v epruveti za vzorčenje.
4. Inkubacija pri sobni temperaturi (20 ~ 25 ℃) 1 minuto, priprava liznega pufra je končana.
5. Oba 25 μl sistema RT-PCR in RT-LAMP sta bila združljiva z 10 μl količine dodatka predloge za poskuse odkrivanja.
Opombe
1. Najmanjšo količino vzorčnega neposrednega lizata, ki ustreza enemu brisu, je mogoče prilagoditi na 400 μl, kar je mogoče prilagoditi glede na potrebe testiranja.
2. Ko je vzorec obdelan z reagentom za sproščanje vzorca, je priporočljivo izvesti naslednjo fazo testa čim prej, pri čemer je čakalni čas intervala po možnosti krajši od 1 ure.
3. pH vzorčnega lizata je kisel in sistem za odkrivanje mora imeti določen pufer.Primeren je za večino detekcij fluorescence PCR, RT-PCR in LAMP s pufrom pH, vendar ni primeren za kolorimetrično detekcijo LAMP brez pufra.
