Predmešanica sonde Multiplex qPCR
Kataloška št.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) je predraztopina za 2 × kvantitativno PCR pomnoževanje v realnem času, za katero sta značilni visoka občutljivost in specifičnost, ki je modre barve in ima učinek dodajanja vzorca.Ta izdelek je predhodno zmešan reagent 2× Mix, ki omogoča do štiri fluorescentne kvantitativne reakcije PCR v eni reakcijski vdolbinici.Ta izdelek vsebuje metodo gensko spremenjenih protiteles za vroč zagon encima Taq, kar močno izboljša občutljivost in specifičnost ojačanja.Hkrati je ta izdelek globoko optimiziral večreakcijski pufer, ki lahko izboljša učinkovitost pomnoževanja reakcije in spodbuja učinkovito pomnoževanje nizkokoncentriranih predlog.Ta izdelek se lahko uporablja za genotipizacijo in multipleksno kvantitativno analizo.
Specifikacija
| Vroči začetek | Vgrajen vroč zagon |
| Metoda odkrivanja | Zaznavanje primerjalne sonde |
| PCR metoda | qPCR |
| polimeraza | Taq DNA polimeraza |
| Vrsta vzorca | DNK |
Pogoji shranjevanja
Izdelek je dobavljen s suhim ledom in ga lahko shranjujete pri -25 ~ -15 ℃ 2 leti.
Navodila
1. ReakcijaSistem
| Komponente | Prostornina (μL) | Končna koncentracija |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primerna mešanica (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/l |
| Mešanica sonde (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Referenčno barvilo Rox | 0,5 | 1× |
| Vzorčna DNK/cDNK | 1-10 | - |
| ddH2O | do 25 | - |
Opombe:Pred uporabo temeljito premešajte, da preprečite čezmerne mehurčke zaradi močnega stresanja.
a.Koncentracija primerja: Mešanica primerja vsebuje več parov primerjev, običajno vsak primer v končni koncentraciji 0,2 μmol/L in se lahko prilagodi med 0,1 in 0,5 μmol/L, kot je primerno.
b.Koncentracija sonde: Probe Mix vsebuje več sond z različnimi fluorescenčnimi signali, koncentracijo vsake sonde pa je mogoče nastaviti med 50 in 250 nmol/L glede na posebno situacijo.
1.Referenca barvila Rox: uporablja se na instrumentu za pomnoževanje PCR v realnem času, kot je Applied Biosystems, za popravljanje napake fluorescenčnega signala, ustvarjenega med vdolbinicami;ta izdelek ne vsebuje reference barvila Rox.Po potrebi se priporoča Cas#10200.
2.Redčenje predloge: qPCR je zelo občutljiv, zato je priporočljivo razredčiti predlogo za uporabo.Če je predloga osnovna raztopina cDNA, prostornina predloge ne sme preseči 1/10 celotne prostornine.
3.Reakcijski sistem: 25 μL, 30 μL ali 50 μL se priporoča za zagotovitev učinkovitosti in ponovljivosti pomnoževanja ciljnega gena.
4.Priprava sistema: Prosimo, pripravite se v super čisti napravi in uporabite konice in reakcijske epruvete brez ostankov nukleaze;priporočljiva je uporaba konic s filtrirnimi vložki.Izogibajte se navzkrižni kontaminaciji in kontaminaciji z aerosoli.
2.Reakcijski program
| Cikel korak | Temp. | Čas | Cikli |
| Začetna denaturacija | 95 ℃ | 5 minut | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 15 sekund | 45 |
| Žarjenje/podaljšanje | 60 ℃ | 30 sekund |
Opombe:
1.Žarjenje/podaljšanje: Temperaturo in čas je mogoče ustrezno prilagoditi glede na načrtovano vrednost primerja Tm.
2.Pridobivanje fluorescenčnega signala: Čas pridobivanja fluorescenčnega signala, ki je potreben za različne instrumente za zaznavanje qPCR, je različen, prosimo, nastavite glede na minimalno časovno omejitev.Čas več običajnih instrumentov je nastavljen na naslednji način:
20 s: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sekund: Applied Biosystems 7300
32 sekund: Applied Biosystems 7500
Opombe
Prosimo, da nosite potrebno osebno zaščitno opremo, kot je laboratorijski plašč in rokavice, da zagotovite svoje zdravje in varnost!
