Univerzalna predmešanica SYBR GREEN qPCR (modra)

Kataloška št.: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (na osnovi barvila) je predraztopina za 2 × kvantitativno PCR pomnoževanje v realnem času, za katero sta značilni visoka občutljivost in specifičnost, je modre barve in ima učinek sledenja dodatku vzorca.Osrednja komponenta Taq DNA polimeraza uporablja vroč zagon protiteles za učinkovito zaviranje nespecifičnega pomnoževanja zaradi žarjenja primerja med pripravo vzorca.Hkrati formula doda spodbujevalne dejavnike za izboljšanje učinkovitosti pomnoževanja reakcije PCR in izenači pomnoževanje genov z različnimi vsebnostmi GC (30 ~ 70 %), tako da lahko kvantitativni PCR pridobi dobro linearno razmerje v širokem kvantitativnem regiji.Ta izdelek vsebuje posebno barvilo ROX Passive Reference Dye, ki je uporabno za večino instrumentov qPCR.Prilagajanje koncentracije ROX na različnih instrumentih ni potrebno.Za pripravo reakcijskega sistema za pomnoževanje je potrebno samo dodati primerje in predloge.

Komponente

Universal Blue qPCR Master Mix

Pogoji shranjevanja

Izdelek je dobavljen z ledenimi vložki in ga je mogoče hraniti pri -25 ℃ ~ -15 ℃ 18 mesecev.Pri shranjevanju ali pripravi reakcijskega sistema se je treba izogibati močnemu svetlobnemu obsevanju.

Specifikacija

Navodila

1. Reakcijski sistem

[Opomba]: Pred uporabo temeljito premešajte, da preprečite čezmerne mehurčke zaradi močnega stresanja.

a) Koncentracija primerja: Končna koncentracija primerja je 0,2 μmol/L in jo je mogoče prilagoditi med 0,1 in 1,0 μmol/L, kot je primerno.

b) Koncentracija vzorca: Če je vzorec nerazredčena osnovna raztopina cDNA, uporabljeni volumen ne sme preseči 1/10 celotnega volumna reakcije qPCR.

c) Redčenje šablone: ​​Priporočljivo je, da osnovno raztopino cDNA razredčite za 5- do 10-krat.Optimalna količina dodane predloge je boljša, če je vrednost Ct, pridobljena z ojačanjem, 20-30 ciklov.

d) Reakcijski sistem: Priporočljivo je, da uporabite 20 μL ali 50 μL, da zagotovite učinkovitost in ponovljivost pomnoževanja ciljnega gena.

e) Priprava sistema: Prosimo, pripravite se v super čisti napravi in ​​uporabite konice in reakcijske epruvete brez ostankov nukleaze;priporočljiva je uporaba konic s filtrirnimi vložki.Izogibajte se navzkrižni kontaminaciji in kontaminaciji z aerosoli.

2.Reakcijski program

Standardni program

Hitri program

[Opomba]: Hitri program je primeren za veliko večino genov, standardne programe pa lahko preizkusimo za posamezne kompleksne gene sekundarne strukture.

a) Temperatura in čas žarjenja: prilagodite glede na dolžino primerja in ciljnega gena.

b) Pridobivanje fluorescenčnega signala (★): nastavite poskusni postopek v skladu z zahtevami v navodilih za uporabo instrumenta.

c) Talilna krivulja: Privzeti program instrumenta se lahko uporablja normalno.

3. Analiza rezultatov 

Za kvantitativne poskuse so bile potrebne najmanj tri biološke ponovitve.Po reakciji je treba potrditi krivuljo pomnoževanja in krivuljo taljenja.

3.1 Krivulja ojačanja:

Standardna ojačitvena krivulja je v obliki črke S.Kvantitativna analiza je najbolj natančna, ko vrednost Ct pade med 20 in 30. Če je vrednost Ct manjša od 10, je potrebno razredčiti predlogo in ponovno izvesti test.Ko je vrednost Ct med 30-35, je treba povečati koncentracijo šablone ali volumen reakcijskega sistema, da se izboljša učinkovitost pomnoževanja in zagotovi točnost analize rezultatov.Ko je vrednost Ct večja od 35, rezultati testa ne morejo kvantitativno analizirati izražanja gena, lahko pa se uporabijo za kvalitativno analizo.

3.2 Talilna krivulja:

En sam vrh krivulje taljenja kaže, da je specifičnost reakcije dobra in da je mogoče izvesti kvantitativno analizo;če talilna krivulja kaže dvojne ali večkratne vrhove, kvantitativne analize ni mogoče izvesti.Krivulja taljenja kaže dvojne vrhove in treba je presoditi, ali je neciljni vrh začetni dimer ali nespecifično pomnoževanje z elektroforezo v agaroznem gelu DNA.Če gre za dimer primerja, je priporočljivo zmanjšati koncentracijo primerja ali preoblikovati primerje z visoko učinkovitostjo pomnoževanja.Če gre za nespecifično ojačanje, zvišajte temperaturo žarjenja ali preoblikujte primerje s specifičnostjo.

Opombe

Prosimo, nosite potrebno osebno zaščitno opremo, kot je laboratorijski plašč in rokavice, da zagotovite svoje zdravje in varnost！

Ta izdelek je SAMO za raziskovalno uporabo！