Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kataloška št.: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) je komplet za multipleksno kvantitativno PCR, ki temelji na RNA kot predlogi.V procesu eksperimenta smo v isti epruveti izvedli reverzno transkripcijo in kvantitativno PCR, kar je poenostavilo eksperimentalno delovanje in zmanjšalo tveganje kontaminacije.V tem kompletu je bila prva veriga cDNA učinkovito sintetizirana s toplotno odporno reverzno transkriptazo in kvantitativno pomnožena z HotStart Tag DNA polimerazo.Komplet vsebuje predvsem optimiziran pufer MP, mešanico encimov itd. Raztopina pufra že vsebuje Mg2+in dNTP.Poleg tega so dodani dejavniki, ki lahko učinkovito zavirajo nespecifično pomnoževanje PCR in izboljšajo učinkovitost pomnoževanja večkratnih reakcij qPCR, kar lahko zagotovi učinkovitost pomnoževanja in izvede do večkratne pomnoževalne reakcije.Dodan je bil sistem dUTP/UDG za učinkovito preprečevanje tveganja kontaminacije z aerosoli.
Komponente
1. Medpomnilnik
2. Encimska mešanica
Specifikacija
| Vroči začetek | Vgrajen vroč zagon |
| Metoda odkrivanja | Zaznavanje primerjalne sonde |
| PCR metoda | Enostopenjski RT-qPCR |
| polimeraza | Taq DNA polimeraza |
| Vrsta vzorca | DNK |
Pogoji shranjevanja
Izdelek je dobavljen s suhim ledom in ga je mogoče hraniti pri -25 ~ -15 ℃ 1 leto.Izogibati se je treba pogostemuzamrzovanje-odmrzovanje.Priporočljivo je, da shranite ločeno.
Navodila
1.Reakcija Sistem
| Komponente | Prostornina (μL) | Končna koncentracija |
| 2 × MP medpomnilnik | 12.5 | 1× |
| Encimska mešanica | 1 | - |
| Mešanica primerja/sonde (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Vzorčna RNA | 1-10 | - |
| H2O brez RNaze | do 25 | - |
Opombe:
Pred uporabo dobro premešajte, izogibajte se čezmernim mehurčkom, ki jih povzročajo močne vibracije.
a.Koncentracija primerja: mešanica primerja, vključno z multipleksnim primerjem, odvisno od situacije je optimalna koncentracija primerja med 0,1 in 1,0 μM.
b.Koncentracija sonde: Mešanica sonde, vključno z različno označevanjem multipleksne sonde, fluorescentna skupina, odvisno od situacije je optimalna koncentracija sonde morda med 0,05 in 0,5 μM.
c.Redčenje predloge: qPCR je zelo občutljiv in priporočamo razredčenje predloge.Kontrolna vrednost Ct je primerna med 20 in 35.
d.Priprava sistema: pripravite v ultra čisti delovni mizi ter pipetorju in reakcijski epruveti brez ostankov nukleaze;priporočljiva je uporaba glave pištole s filtrirnim elementom.Izogibajte se navzkrižni kontaminaciji in kontaminaciji z aerosoli.
2. Optimizirano kolesarjenjeProtokol
| Cikel korak | Temp. | Čas | Cikli |
| Povratni prepis | 50 ℃a | 20 minut | 1 |
| Začetna denaturacija | 95 ℃ | 5 minut | 1 |
| Reakcija ojačanja | 95 ℃ | 15 sekund |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sekund c |
Opombe:
a.Povratni prepis: Temperaturo lahko izberete 42°C ali 50°C.
b.Reakcija pomnoževanja: Temperaturo prilagodimo glede na vrednost Tm oblikovanih primerjev.
c.Pridobivanje fluorescenčnega signala: nastavite poskusni postopek v skladu z zahtevami priročnika za instrument.
Opombe
Prosimo, da nosite potrebno osebno zaščitno opremo, kot so laboratorijski plašč in rokavice, da zagotovite svoje zdravje in varnost.
