Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) je enoverižni polipeptid, ki vsebuje 4 disulfidne vezi z molekulsko maso približno 13,7 kDa.RNaza A je endoribonukleaza, ki specifično razgradi enoverižno RNA na C in U ostankih.Natančneje, cepitev prepozna fosfodiestrsko vez, ki jo tvorita 5'-riboza nukleotida in fosfatna skupina na 3'-ribozi sosednjega pirimidinskega nukleotida, tako da se 2,3'-ciklični fosfati hidrolizirajo v ustrezne 3 ′nukleozidni fosfati (npr. pG-pG-pC-pA-pG cepi RNaza A, da nastanejo pG-pG-pCp in A-PG).RNaza A je najbolj aktivna pri cepljenju enoverižne RNA.Priporočena delovna koncentracija je 1-100 μG/mL, združljiva z različnimi reakcijskimi sistemi.Nizko koncentracijo soli (0-100 mM NaCl) lahko uporabimo za rezanje enoverižne RNA, dvoverižne RNA in verig RNA, ki nastanejo s hibridizacijo RNA-DNA.Vendar pri visoki koncentraciji soli (≥0,3 M) RNaza A specifično cepi le enoverižno RNA.
RNaza A se najpogosteje uporablja za odstranjevanje RNK med pripravo plazmidne DNA ali genomske DNA. Ne glede na to, ali je DNaza med postopkom priprave aktivna ali ne, lahko zlahka vpliva na reakcijo.Tradicionalno metodo kuhanja v vodni kopeli lahko uporabimo za inaktivacijo aktivnosti DNaze.Ta izdelek ne vsebuje DNaze in proteaze in pred uporabo ni potrebna toplotna obdelava.Poleg tega se ta izdelek lahko uporablja tudi v poskusih molekularne biologije, kot sta analiza zaščite RNaze in analiza zaporedja RNK.
Pogoji shranjevanja
Izdelek lahko shranjujete pri -25～-15℃, veljaven 2 leti.
Navodila
To je ena od običajnih metod za pripravo raztopine za shranjevanje RNaze A.Pripravite ga lahko tudidruge metode v skladu s tradicionalnimi metodami v laboratoriju ali referenčni literaturi (kot nprneposredno raztapljanje v 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ali raztopini Tris-NaCl)
1. Uporabite 10 mM natrijevega acetata (pH 5,2), da pripravite 10 mg/ml raztopine za shranjevanje RNaze A.
2. Ogrevanje pri 100 ℃ 15 minut
3. Ohladite na sobno temperaturo, dodajte 1/10 volumna 1 M Tris-HCl (pH 7,4), nastavite pH na 7,4 (zana primer, dodajte 500 ml 10 g/ml raztopine za shranjevanje RNaze 1M Tris-HCL, PH7,4)
4. Podpakirano pri -20 ℃ za shranjevanje v zamrznjenem stanju, ki je lahko stabilno do 2 leti.
[Opombe]: Pri vrenju raztopine RNazeA v nevtralnih pogojih bo nastala oborina RNaze;Kuhajte ga pri nižjem pH in če pride do padavine, se lahko opazi, kar je lahko posledica prisotnosti beljakovinskih nečistoč.Če po vrenju najdemo usedlino, lahko nečistoče odstranimo s centrifugiranjem pri visoki hitrosti (13000 vrt./min) in nato zapakiramo za shranjevanje v zamrzovalniku.
Informacije o izdelku
| Sopomenke | ribonukleaza I;pankreasna ribonukleaza;Ribonukleaza 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolaza;Rnaza A;Endoribonulceaza I |
| št. CAS | 9001-99-4 |
| Videz | Bel liofiliziran prašek |
| Molekularna teža | ~ 13,7 kDa (aminokislinsko zaporedje) |
| Ph vrednost | 7,6 (razpon aktivnosti 6-10) |
| Primerna temperatura | 60 ℃ (razpon aktivnosti 15-70 ℃) |
| Aktivacijsko sredstvo | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Inhibitor rnaze |
| Metoda inaktivacije | Ni ga mogoče inaktivirati s segrevanjem, predlaga se uporaba centrifugalne kolone |
| Izvor | Goveje |
| Topnost | Topen v vodi (10 mg/ml) |
| Izguba na suhem | ≤5,0 % |
| Aktivnost encimov | ≥60 Kunitzovih enot/mg |
| Izoelektrična točka | 9.6 |
Opombe
Zaradi vaše varnosti in zdravja med delom nosite laboratorijske plašče in rokavice za enkratno uporabo.
