Robustart Taq DNA polimeraza
Robustart Taq DNA Polymerase je vroča DNA polimeraza.Ta izdelek lahko ne le bolje zavira nespecifično reakcijo, ki jo povzroči nespecifično žarjenje primerjev ali agregacija primerjev v procesu priprave in pomnoževanja sistema PCR.Zato ima odlično specifičnost in je učinkovitejši za pomnoževanje predlog z nizko koncentracijo ter je primeren za multipleksno reakcijo pomnoževanja PCR.Poleg tega ima ta izdelek zelo dobro uporabnost in stabilne rezultate pomnoževanja je mogoče doseči pri različnih vrstah reakcij PCR.
Komponente
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimeraza
2.10 × PCR pufer II (brez Mg²+) (neobvezno)
3.25 mM MgCl2(neobvezno)
* 10 × PCR pufer II (brez Mg²+) ne vsebuje dNTP in Mg²+, dodajte dNTP in MgCl2pri pripravi reakcijskega sistema.
Priporočene aplikacije
1.Hitro ojačanje.
2.Večkratno ojačanje.
3.Neposredno pomnoževanje krvi, brisov in drugih vzorcev.
4.Odkrivanje bolezni dihal.
Pogoj shranjevanja
-20 °C za dolgotrajno shranjevanje, pred uporabo dobro premešati, izogibajte se pogostemu zamrzovanju in odmrzovanju.
*Če se po hlajenju pojavi padavina, je to normalno;pred mešanjem in uporabo je priporočljivo uravnotežiti sobno temperaturo.
Definicija enote
Ena aktivna enota (U) je definirana kot količina encima, ki vključi 10 nmol deoksiribonukleotida v material, netopen v kislini, pri 74 °C za 30 minut z uporabo aktivirane DNK sperme lososa kot matrice/primera.
Kontrola kakovosti
1.Elektroforetska čistost SDS-PAGE več kot 98 %.
2.Občutljivost ojačanja, nadzor od serije do serije, stabilnost.
3.Ni aktivnosti eksogene nukleaze, ni kontaminacije z eksogeno endonukleazo ali eksonukleazo
Navodila
Nastavitev reakcije
| Komponente | Glasnost (μL) | Končna koncentracija |
| 10 × PCR pufer II (brez Mg²+)a | 5 | 1× |
| dNTP (10 mM vsak dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA polimeraza (5U/µL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × temeljna mešanicab | 2 | 1× |
| Predloga | - | < 1 μg/reakcijo |
| ddH2O | do 50 | - |
Opombe:
1) a.Pufer ne vsebuje dNTP in Mg²+, dodajte dNTP in MgCl2pri pripravi reakcijskega sistema.
2) b.Če se uporablja za qPCR/qRT-PCR, je treba reakcijskemu sistemu dodati fluorescentne sonde.Običajno bo končna koncentracija primerja 0,2 μM dala dobre rezultate;če je učinkovitost reakcije slaba, lahko koncentracijo primerja prilagodite v območju 0,2-1 μM.Koncentracija sonde je običajno optimizirana v območju 0,1–0,3 μM.Poskuse z gradientom koncentracije je mogoče izvesti, da bi našli najboljšo kombinacijo primerja in sonde.
Protokol termičnega cikla
| Redni PCRpostopek | |||
| korak | Temperatura | Čas | Cikli |
| Preddenaturacija | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Žarjenje/podaljšanje | 56-64 ℃ | 20-60 sek | |
| Hitri PCRpostopek | |||
| korak | Temperatura | Čas | Cikli |
| Preddenaturacija | 95 ℃ | 30 sekund | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Žarjenje/podaljšanje | 56-64 ℃ | 5-20 sek | |
Opombe
1.Hitrost pomnoževanja hitre DNA polimeraze ne sme biti manjša od 1 kb/10 s.Hitrost dviga in padca temperature, način nadzora temperature in učinkovitost toplotne prevodnosti različnih instrumentov PCR se zelo razlikujejo, zato je priporočljivo optimizirati optimalne reakcijske pogoje za določen hitri instrument PCR.
2.Sistem je zelo prilagodljiv, z večjo specifičnostjo in občutljivostjo.
3.Primerno za uporabo kot reagenti za detekcijo PCR z visoko občutljivostjo in se lahko uporablja v reakcijah pomnoževanja multipleksne PCR.
4.5'→3' polimerazna aktivnost, 5'→3' eksonukleazna aktivnost;ni 3'→5' eksonukleazne aktivnosti;brez funkcije lektoriranja.
5.Primerno za kvalitativno in kvantitativno testiranje PCR in RT-PCR.
6.3' konec produkta PCR je A, ki se lahko neposredno klonira v vektor T.
7.Tristopenjska metoda se priporoča za primerje z nizkimi temperaturami žarjenja ali za pomnoževanje fragmentov, daljših od 200 bp.
