prou
Izdelki
Proteinaza K mNGS (tekočina) HC4509A Prikazana slika
  • Proteinaza K mNGS (tekočina) HC4509A

Proteinaza K mNGS (tekočina)


Kataloška št.: HC4509A

Pakiranje: 5mL/10mL/100mL/1L

Brez DNaze, RNaze, Nikaze

Aktivnost: ≥800 U/ml

Rok uporabnosti 2 leti

Enkratna prostornina 30L

Skladen z ostanki nukleinskih kislin v ozadju mNGS

 

Opis izdelka

Podrobnosti o izdelku

podatki

Proteinaza K je stabilna serinska proteaza s široko substratno specifičnostjo.Razgradi veliko beljakovin v naravnem stanju tudi v prisotnosti detergentov.Dokazi iz študij kristalne in molekularne strukture kažejo, da encim pripada družini subtilizinov s katalitično triado aktivnega mesta (Asp39- Njegovega69-Ser224).Prevladujoče mesto cepitve je peptidna vez, ki meji na karboksilno skupino alifatskih in aromatskih aminokislin z blokiranimi alfa amino skupinami.Običajno se uporablja zaradi svoje široke specifičnosti.Ta proteinaza K je posebej zasnovana za mNGS.V primerjavi z drugo proteinazo K vsebuje še manj kontaminacije nukleinske kisline z enako encimsko učinkovitostjo, kar bi lahko bolje zagotovilo nadaljnjo uporabo mNGS.


  • Prejšnja:
  • Naslednji:

  • Pogoji shranjevanja

    2-8 ℃ 2 leti

     

    Specifikacija

    Videz

    Brezbarvna do svetlo rjava tekočina

    dejavnost

    ≥800 U/ml

    Koncentracija beljakovin

    ≥20 mg/ml

    Nickase

    Noben zaznan

    DNaza

    Noben zaznan

    RNaza

    Noben zaznan

     

    Lastnosti

    številka EC

    3.4.21.64(Rekombinant iz albuma Tritirachium)

    Izoelektrična točka

    7.81

    Optimalni pH

    7,0- 12,0 Sl. 1

    Optimalna temperatura

    65 ℃ Sl. 2

    pH stabilnost

    pH 4,5- 12,5 (25 ℃, 16 h) Slika 3

    Toplotna stabilnost

    Pod 50 ℃ (pH 8,0, 30 min) Sl. 4

    Stabilnost pri shranjevanju

    Več kot 90 % aktivnosti 12 mesecev pri 25 ℃

    Aktivatorji

    SDS, sečnina

    Zaviralci

    diizopropil fluorofosfat;fenilmetilsulfonil fluorid

     

     

    Aplikacije

    1. Komplet za genetsko diagnostiko

    2. Kompleti za ekstrakcijo RNK in DNK

    3. Ekstrakcija neproteinskih komponent iz tkiv, razgradnja beljakovinskih nečistoč, kot je DNAcepiva in priprava heparina

    4. Priprava kromosomske DNA s pulzno elektroforezo

    5. Western blot

    6. Encimsko glikozilirani albuminski reagenti in vitro diagnostika

     

    Previdnostni ukrepi

    Med uporabo ali tehtanjem nosite zaščitne rokavice in očala, po uporabi pa imejte dobro prezračeno.Ta izdelek lahko povzroči kožno alergijsko reakcijo in resno draženje oči.Pri vdihavanju lahko povzroči simptome alergije ali astme ali dispnejo.Lahko povzroči draženje dihalnih poti.

     

    Definicija enote

    Ena enota (U) je opredeljena kot količina encima, ki je potrebna za hidrolizacijo kazeina, da se proizvede 1 μmoltirozina na minuto pod naslednjimi pogoji.

     

     Priprava reagentov

    Reagent I: 1 g mlečnega kazeina smo raztopili v 50 ml 0,1 M raztopine natrijevega fosfata (pH 8,0), inkubirali v vodi pri 65-70 ℃ 15 minut, premešali in raztopili, ohladili z vodo, naravnali z natrijevim hidroksidom na pH 8,0 in fiksirali volumen 100 ml.

    Reagent II: 0,1 M trikloroocetna kislina, 0,2 M natrijev acetat, 0,3 M ocetna kislina.

    Reagent III: 0,4 M Na2CO3rešitev.

    Reagent IV: reagent Forint, razredčen s čisto vodo za 5-krat.

    Reagent V: encimsko razredčilo: 0,1 M raztopina natrijevega fosfata (pH 8,0).

    Reagent VI: raztopina tirozina: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tirozina, raztopljenega z 0,2M HCl.

     

    Postopek

    1. 0,5 ml reagenta I predhodno segrejemo na 37 ℃, dodamo 0,5 ml raztopine encima, dobro premešamo in inkubiramo pri37 ℃ 10 minut.

    2. Dodajte 1 ml reagenta II, da zaustavite reakcijo, dobro premešajte in nadaljujte z inkubacijo 30 minut.

    3. Centrifugirajte reakcijsko raztopino.

    4. Vzemite 0,5 ml supernatanta, dodajte 2,5 ml reagenta III, 0,5 ml reagenta IV, dobro premešajte in inkubirajte pri 37 ℃.za 30 minut.

    5. OD660je bila določena kot OD1;slepa kontrolna skupina: 0,5 ml reagenta V se uporabi za nadomestitev encimaraztopina za določanje OD660kot OD2, ΔOD=OD1-OD2.

    6. Standardna krivulja L-tirozina: 0,5 ml raztopine L-tirozina z različnimi koncentracijami, 2,5 ml reagenta III, 0,5 ml reagenta IV v 5 ml centrifugalni epruveti, inkubiramo pri 37 ℃ 30 minut, zaznamo OD660za različne koncentracije L-tirozina, nato dobimo standardno krivuljo Y=kX+b, kjer je Y koncentracija L-tirozina, X je OD600.

     

    Izračun

     

    2: Skupna prostornina reakcijske raztopine (mL)

    0,5: Volumen raztopine encima (mL)

    0,5: Volumen reakcijske tekočine, uporabljen pri kromogenem določanju (mL)

    10: Reakcijski čas (min)

    Df: Večkratno redčenje

    C: koncentracija encima (mg/ml)

     

    Reference

    1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.

    2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biophys.Res.Komun.(1971);44:513.

    3. Hilz, H.et al.,EUR.J. Biochem.(1975);56: 103–108.

    4. Sambrook Jet al., Molekularno kloniranje: Laboratorijski priročnik, 2. izdaja, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).

     

     

    Številke

    sl.1 Optimum pH

    100 mM puferska raztopina: pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCl;pH9,0-12,5, glicin-NaOH. Koncentracija encima: 1 mg/mL

     

    Slika 2 Optimalna temperatura

    Reakcija v 20 mM K-fosfatnem pufru pH 8,0.Koncentracija encima: 1 mg/mL

     

    Slika 3 pH Stabilnost

    25 ℃, 16 h-obdelava s 50 mM pufrsko raztopino: pH 4,5-5,5, acetat;pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCl.pH 9,0-12,5, glicin-NaOH.Koncentracija encima: 1 mg/mL

     

    Sl.4 Toplota stabilnost

    30-minutna obdelava s 50 mM Tris-HCl pufrom, pH 8,0.Koncentracija encima: 1 mg/mL

     

    Sl.5 Shranjevanje stability at 25 ℃

    Tukaj napišite svoje sporočilo in nam ga pošljite