2×PCR glavna mešanica (brez barvila)
PCR Master Mix je neke vrste običajna predhodno mešana raztopina PCR, ki je pripravljena za uporabo, vključno s Taq DNA polimerazo, dNTP mešanico MgCl2 in optimiziranim pufrom.Med reakcijo lahko za pomnoževanje dodamo le primer in predlogo, kar zelo poenostavi korake delovanja eksperimenta.Ta izdelek vsebuje odlične stabilizatorje in se lahko hrani 3 mesece pri 4 ℃.Produkt PCR ima 3′-dA izboklino in ga je mogoče zlahka klonirati v T vektor.
Pogoji shranjevanja
Izdelek je treba hraniti pri -25 ℃ ~ -15 ℃ dve leti.
Specifikacije
| Zvestoba (vs.Taq) | 1× |
| Vroči začetek | No |
| Previs | 3′-A |
| polimeraza | Taq DNA polimeraza |
| Format reakcije | SuperMix ali Master Mix |
| Hitrost reakcije | Standardno |
| tip izdelka | Glavna mešanica PCR (2×) |
Navodila
1.Reakcijski sistem
| Komponente | Velikost (μL) |
| Šablona DNK | Primerno |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| Glavna mešanica PCR | 25 |
| ddH2O | do 50 |
2.Protokol ojačanja
| Kolesarite korake | Temperatura (°C) | Čas | Cikli |
| Preddenaturacija | 94 ℃ | 5 minut | 1 |
| Denaturacija | 94 ℃ | 30 sekund | 35 |
| Žarjenje | 50-60 ℃ | 30 sekund | |
| Razširitev | 72 ℃ | 30-60sek/kb | |
| Končni podaljšek | 72 ℃ | 10 minut | 1 |
Opombe:
1) Uporaba predloge: 50-200 ng genomske DNA;0,1-10 ng plazmidne DNA.
2) Mg2+koncentracija: Ta izdelek vsebuje 3 mM MgCl2, ki je primeren za večino reakcij PCR.
3) Temperatura žarjenja: Glejte teoretično vrednost Tm primerjev.Temperaturo žarjenja lahko nastavite na 2-5 ℃ nižje od teoretične vrednosti primerja.
4) Čas podaljšanja: za molekularno identifikacijo se priporoča 30 s/kb.Za kloniranje genov, 60sek/kb je priporočljivo.
Opombe
1.Zaradi vaše varnosti in zdravja med delom nosite laboratorijske plašče in rokavice za enkratno uporabo.
2.Samo za raziskovalno uporabo!
