2×HiF Taq plus Master Mix
Kataloška št.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (z barvilom) je pripravljena za uporabo 2 × predhodno mešana raztopina, ki vsebuje Plus HIF DNA polimerazo, dNTP in optimiziran pufer.Dve monoklonski protitelesi pri sobni temperaturi, ki zavirata aktivnost polimeraze in aktivnost 3′→5′eksonukleaze, sta dodani glavni mešanici za enostaven in visoko specifičen Hot Start PCR.Ekstenzijski faktor je dodan glavni mešanici, da encim dobi sposobnost pomnoževanja dolgih fragmentov, dolžina pomnoževanja je lahko do 13 kb, encim ima 5′→3′ aktivnost DNA polimeraze in 3′→5′ eksonukleazne aktivnosti, je njegova natančnost 83-krat večja od Taq DNA polimeraze, kar je 9-krat večja od običajne DNA polimeraze.Primeren je za ojačanje kompleksnih šablon, produkt ojačanja je topi konec.
2×HIF Taq plus Master Mix (With Dye) ima prednosti hitrega in enostavnega, visoke občutljivosti, močne specifičnosti, dobre stabilnosti itd., reakcijskemu sistemu je treba dodati samo primerje in predloge in ga je mogoče ojačati z dvema postopnega protokola, ki poenostavi poskusne korake in prihrani čas.Ta izdelek vsebuje indikatorska barvila za elektroforezo, izdelke PCR pa je mogoče uporabiti neposredno za elektroforezo.Poleg tega izdelek vsebuje tudi specifično zaščitno sredstvo, tako da lahko glavna mešanica ohrani stabilno aktivnost po ponavljajočem se zamrzovanju in odmrzovanju.
Pogoji shranjevanja
Izdelke je treba hraniti pri -25 ~ -15 ℃ 1 leto.
Specifikacije
Specifikacije produkta | Master Mix |
Koncentracija | 2× |
Vroči začetek | Vgrajen Hot Start |
Previs | Top |
Hitrost reakcije | Hitro |
Velikost (končni izdelek) | Do 13kb |
Pogoji za prevoz | Suhi led |
Tip izdelka | Premiksi PCR visoke ločljivosti |
Navodila
1.Reakcijski sistem PCR
Komponente | Prostornina (μL) |
Predloga DNK | Primerno |
Napredni primer (10 μmol/L) | 2.5 |
Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | do 50 |
2.Priporočena uporaba različnih predlog
Vrsta predloge | Povečajte fragmente od 1 kb do 10 kb |
Genomska DNK | 50 ng-200 ng |
Plazmidna ali virusna DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1–2,5 µL (ne presezite 10 % končnega reakcijskega volumna PCR) |
3.Protokol ojačanja
1) Protokol v dveh korakih (predloga zapletenosti)
Cikel korak | Temp. | Čas | Cikli |
Začetna denaturacija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denaturacija | 98 ℃ | 10 sekund | 30-35 |
Razširitev | 68 ℃ | 30 s/kb | |
Končni podaljšek | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Protokol v treh korakih (običajen protokol)
Cikel korak | Temp. | Čas | Cikli |
Začetna denaturacija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denaturacija | 98 ℃ | 10 sekund | 30-35 |
Žarjenje | 60 ℃ | 20 sekund | |
Razširitev | 72 ℃ | 30 s/kb | |
Končni podaljšek | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Protokol gradienta žarjenja (predloga zapletenosti)
Cikel korak | Temperatura | Čas | Cikli |
Začetna denaturacija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denaturacija | 98 ℃ | 10 sekund | 15 (1 ℃ zmanjšanje na cikel) |
Gradientno žarjenje | 70-55 ℃ | 20 sekund | |
Razširitev | 72 ℃ | 30 s/kb | |
Denaturacija | 98 ℃ | 10 sekund |
20 |
Žarjenje | 55 ℃ | 20 sekund | |
Razširitev | 72 ℃ | 30 s/kb | |
Končni podaljšek | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Funkcije pod različnimi protokoli ojačanja
Protocol | Dvostopenjski | Tristopenjski | Gradientno žarjenje |
spec. | hitro | srednje | počasi |
Specifičnost | visoka | srednje | visoka |
Izkoristek PCR | srednje | visoka | srednje |
Stopnja odkrivanja | visoka | srednje | visoka |
Opombe
Prosimo, nosite potrebno osebno zaščitno opremo, kot je laboratorijski plašč in rokavice, da zagotovite svoje zdravje in varnost!