DNaza I (brez Rnaze) (5u/ul)
Kataloška št.: HC4007A
DNaza I (deoksiribonukleaza I) je endodeoksiribonukleaza, ki lahko prebavi eno- ali dvoverižno DNA.Prepozna in cepi fosfodiesterske vezi, da proizvede monodeoksinukleotide ali eno- ali dvoverižne oligodeoksinukleotide s fosfatnimi skupinami na 5'-terminalu in hidroksilnimi na 3'-terminalu.Aktivnost DNaze I je odvisna od Ca2+in ga lahko aktivirajo dvovalentni kovinski ioni, kot je Mn2+in Zn2+.5 mM Ca2+ščiti encim pred hidrolizo.V prisotnosti Mg2+, lahko encim naključno prepozna in razcepi katero koli mesto na kateri koli verigi DNK.V prisotnosti Mn2+, se lahko dvojne verige DNK istočasno prepoznajo in razcepijo na skoraj istem mestu, da nastanejo ravni končni fragmenti DNK ali lepljivi končni fragmenti DNK z 1-2 štrlečima nukleotidoma.
Komponente
| Ime | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaza I, brez RNaze | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I pufer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Pogoji shranjevanja
-25 ℃ ~ -15 ℃ za shranjevanje;Prevoz pod ledom.
Navodila
1. Pripravite reakcijsko raztopino v epruveti brez RNaze v skladu s spodaj navedenimi razmerji:
| Komponenta | Glasnost |
| RNA | X µg |
| 10 × pufer DNaze I | 1 μL |
| DNaza I, brez RNaze (5U/μL) | 1 U na µg RNA① |
| ddH2O | Do 10 μl |
Opomba: ①Izračunajte količino DNaze I, ki jo je treba dodati glede na količino RNA.
2. 37 ℃ 15 minut;
3. Dodajte 0,5 M EDTA do končne koncentracije 2,5 mM ~ 5 mM in segrevajte pri 65 ℃ 10 minut, da ustavite reakcijo.Vzorec se lahko neposredno uporabi za naslednjo reakcijo, kot je reverzna transkripcijaposkus.
Definicija enote
Ena enota je definirana kot količina encima, ki popolnoma razgradi 1 µg pBR322DNK v 10 minutah pri 37 ℃.
Kontrola kakovosti
RNaza:5U DNaze I z 1,6 µg MS2 RNA 4 ure pri 37 ℃ ne povzroči razgradnje kotdoločeno z elektroforezo v agaroznem gelu.
Opombe
1. Pripravite 0,5MEDTA sami.
2. Uporabite 1U DNaze I na µg RNA.Če pa je RNA manjša od 1 µg, uporabite 1U DNazo I.
3. Med delovanjem encim postavite na led.
