Komplet za genotipizacijo miši

Kataloška št.: HCR2021A

Ta izdelek je komplet, zasnovan za hitro identifikacijo genotipov miši, vključno s surovo ekstrakcijo DNK in sistemom za pomnoževanje PCR.Izdelek se lahko uporablja za pomnoževanje PCR neposredno iz mišjega repa, ušesa, prsta na nogi in drugih tkiv po preprostem cepljenju z liznim pufrom in proteinazo k.Brez digestije čez noč, ekstrakcije s fenol-kloroformom ali čiščenja s kolono, kar je preprosto in skrajša čas eksperimentov.Izdelek je primeren za pomnoževanje tarčnih fragmentov do 2 kb in multipleks PCR reakcije z do 3 pari primerjev.Mešanica 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix vsebuje gensko spremenjeno DNA polimerazo, Mg²⁺, dNTP in optimiziran puferski sistem za zagotavljanje visoke učinkovitosti pomnoževanja in tolerance za inhibitorje, tako da je mogoče izvesti reakcije PCR z dodajanjem šablone in primerjev ter rehidracijo izdelka do 1×.Produkt PCR, pomnožen s tem produktom, ima vidno bazo "A" na koncu 3' in se lahko po čiščenju uporablja neposredno za kloniranje TA.

Komponente

Pogoji shranjevanja

Izdelke je treba hraniti pri -25 ~ -15 ℃ 2 leti.Po odmrzovanju lahko Lysis Buffer shranite pri 2~8 ℃ za kratkotrajno večkratno uporabo in pri uporabi dobro premešajte.

Aplikacija

Ta izdelek je primeren za analizo izločitve miši, odkrivanje transgenih, genotipizacijo itd.

Lastnosti

1.Preprosto delovanje: ni potrebe po ekstrakciji genomske DNA;

2.Široka uporaba: primerno za neposredno pomnoževanje različnih mišjih tkiv.

Navodila

1.Sprostitev genomske DNK

1) Priprava lizata

Tkivni lizat se pripravi glede na število vzorcev miši, ki jih je treba lizirati (tkivni lizat je treba pripraviti na kraju samem v skladu z odmerkom in ga za uporabo temeljito premešati), delež reagentov, potrebnih za en vzorec, pa je naslednji:

2) Priprava vzorca in liza

Priporočena uporaba tkiv

Vzemite ustrezno količino vzorcev mišjega tkiva v čiste centrifugalne epruvete, dodajte 200 μL svežega tkivnega lizata v vsako centrifugirno epruveto, vrtinčite in stresajte, nato inkubirajte pri 55 °C 30 minut in nato segrevajte pri 98 °C 3 minute.

3) Centrifugiranje

Lizat dobro pretresite in 5 minut centrifugirajte pri 12.000 obratih na minuto.Supernatant lahko uporabimo kot predlogo za PCR pomnoževanje.Če je predloga potrebna za shranjevanje, prenesite supernatant v drugo sterilno epruveto za centrifugo in shranite pri -20 ℃ 2 tedna.

2.PCR pomnoževanje

Odstranite mešanico 2 × Mouse Tissue Direct PCR z -20 ℃ in odmrznite na ledu, premešajte na glavo in pripravite reakcijski sistem PCR v skladu z naslednjo tabelo (delujte na ledu):

Opomba:

a) Dodana količina ne sme preseči 1/10 sistema; če je dodane preveč, je lahko PCR pomnoževanje zavrto.

Priporočeni pogoji PCR

Opomba:

a) Temperatura žarjenja: glede na vrednost Tm primerja je priporočljivo nastaviti temperaturo žarjenja na nižjo vrednost Tm primerja +3~5 ℃.

Pogoste težave in rešitve

1.Brez ciljnih trakov

1) Prekomerni produkt lize.Izberite najprimernejšo količino predloge, običajno ne več kot 1/10 sistema;

2) Prevelik vzorec.Razredčite lizat 10-krat in nato pomnožite ali zmanjšajte velikost vzorca in ponovno lizo;

3) Vzorci tkiv niso sveži.Priporočljivo je uporabiti sveže vzorce tkiva;

4) Slaba kakovost temeljnega premaza.Uporabite genomsko DNK za pomnoževanje, da preverite kakovost primerja in optimizirate zasnovo primerja.

2.Nespecifična amplifikacija

1) Temperatura žarjenja je prenizka in število ciklov je previsoko.Povečajte temperaturo žarjenja in zmanjšajte število ciklov;

2) Koncentracija predloge je previsoka.Zmanjšajte količino šablone ali razredčite šablono 10-krat po ojačanju;

3) Slaba specifičnost primerja.Optimizirajte zasnovo temeljnega premaza.

Opombe

1.Da bi se izognili navzkrižni kontaminaciji med vzorci, je treba pripraviti več orodij za vzorčenje, površino orodij pa lahko po vsakem vzorčenju očistite z 2 % raztopino natrijevega hipoklorita ali čistilom nukleinske kisline, če je potrebna večkratna uporaba.

2.Priporočljivo je, da uporabite sveža mišja tkiva, volumen vzorčenja pa ne sme biti prevelik, da ne bi vplivali na rezultate pomnoževanja.

3.Puferju za lizo se je treba izogibati pogostemu zamrzovanju-odmrzovanju in ga lahko shranite pri 2~8 ℃ za kratkotrajno večkratno uporabo.Pri shranjevanju pri nizki temperaturi lahko pride do obarjanja, zato ga je treba pred uporabo popolnoma raztopiti.

4.Mešanica PCR se mora izogibati pogostemu zamrzovanju in odmrzovanju in jo lahko shranite pri 4 ℃ za kratkotrajno večkratno uporabo.

5.Ta izdelek je samo za znanstvene eksperimentalne raziskave in se ne sme uporabljati pri klinični diagnostiki ali zdravljenju.