Inhibitor rnaze
Zaviralec mišje RNaze je rekombinantni zaviralec mišje RNaze, izražen in prečiščen iz E.coli.Z nekovalentno vezjo se veže na RNazo A, B ali C v razmerju 1:1, s čimer zavira aktivnost treh encimov in ščiti RNA pred razgradnjo.Vendar pa ni učinkovit proti RNazi 1, RNazi T1, S1 nukleazi, RNazi H ali RNazi Aspergillus.Inhibitor mišje RNaze je bil testiran z RT-PCR, RT-qPCR in IVT mRNA in je bil združljiv z različnimi komercialnimi reverznimi transkriptazami, DNA polimerazami in RNA polimerazami.
V primerjavi s človeškimi zaviralci RNaze zaviralec mišje RNaze ne vsebuje dveh cisteinov, ki sta zelo občutljiva na oksidacijo, ki povzroči inaktivacijo zaviralca.Zaradi tega je stabilen pri nizkih koncentracijah DTT (manj kot 1 mM).Zaradi te lastnosti je primeren za uporabo pri reakcijah, kjer so visoke koncentracije DTT škodljive za reakcijo (npr. RT-PCR v realnem času).
Aaplikacija
Ta izdelek se lahko pogosto uporablja v vseh poskusih, kjer je možna interferenca RNaze, da se prepreči razgradnja RNA, kot so:
1.Sinteza prve verige cDNA, RT-PCR, RT-qPCR itd.
2.Ščiti RNA pred razgradnjo med transkripcijo/prevajanjem in vitro (npr. in vitro virusni replikacijski sistem).
3.Inhibicija aktivnosti RNAze med ločevanjem in čiščenjem RNA.
Pogoji shranjevanja
Izdelek lahko shranjujete pri -25～- 15 ℃, velja 2 leti.
Medpomnilnik za shranjevanje
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT in 50 % glicerola.
Definicija enote
Količina inhibitorja mišje RNaze, potrebna za inhibiranje aktivnosti 5 ng ribonukleaze A za 50 %, je bila definirana kot ena enota (U).
Molekulska teža beljakovin
Molekulska masa inhibitorja mišje RNaze je 50 kDa.
Kontrola kakovosti
Eksonukleaza dejavnost:
40 U zaviralca mišje RNaze z 1 μg λ -Hind III razgrajene DNA pri 37 ℃ 16 ur ne povzroči razgradnje, kot je bilo ugotovljeno z elektroforezo v agaroznem gelu.
Aktivnost endonukleaze:
40 U inhibitorja mišje RNaze z 1 μ g λ DNA pri 37 °C 16 ur ne povzroči razgradnje, kot je bilo ugotovljeno z elektroforezo v agaroznem gelu.
Zarezovanje dejavnost:
40 U inhibitorja mišje RNaze z 1 μ g pBR322 pri 37 °C 16 ur ne povzroči razgradnje, kot je bilo ugotovljeno z elektroforezo v agaroznem gelu.
RNaza dejavnost:
40U inhibitorja mišje RNaze z 1,6 μg MS2 RNA 4 ure pri 37 ℃ ne povzroči razgradnje, kot je bilo ugotovljeno z elektroforezo v agaroznem gelu.
E.coli DNK:
40 U inhibitorja mišje RNaze pregledamo na prisotnost genomske DNA E. coli z uporabo TaqMan qPCR s primerji, specifičnimi za lokus 16S rRNA E. coli.Kontaminacija genomske DNA E. coli je ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1. Silovito nihanje ali mešanje bo povzročilo inaktivacijo encima.
2. Optimalno temperaturno območje tega zaviralca je bilo 25-55 ℃, inaktiviran je bil pri 65 ℃ in več.
3. Inhibitor mišje RNaze ni zaviral aktivnosti RNaze H, RNaze 1 in RNaze T1.
4. Zaviranje aktivnosti RNaze je bilo ugotovljeno v širokem razponu pH (pH 5-9 so bili vsi aktivni), največjo aktivnost pa so opazili pri pH 7-8.
5. Ker ribonukleaze običajno ohranijo aktivnost v pogojih denaturacije, je treba paziti, da se izognemo denaturaciji molekul zaviralcev RNaze, ki so kompleksirale z ribonukleazo.Da bi preprečili sproščanje aktivne ribonukleaze, se je treba izogibati temperaturam nad 50 °C in visokim koncentracijam sečnine ali drugih denaturacijskih sredstev.
