Inhibitor rnaze (brez glicerola)
Zaviralec mišje RNaze je rekombinantni zaviralec mišje RNaze, izražen in prečiščen iz E.coli.Z nekovalentno vezjo se veže na RNazo A, B ali C v razmerju 1:1, s čimer zavira aktivnost treh encimov in ščiti RNA pred razgradnjo.Vendar pa ni učinkovit proti RNazi 1, RNazi T1, S1 nukleazi, RNazi H ali RNazi Aspergillus.Inhibitor mišje RNaze je bil testiran z RT-PCR, RT-qPCR in IVT mRNA in je bil združljiv z različnimi komercialnimi reverznimi transkriptazami, DNA polimerazami in RNA polimerazami.
V primerjavi s človeškimi zaviralci RNaze zaviralec mišje RNaze ne vsebuje dveh cisteinov, ki sta zelo občutljiva na oksidacijo, ki povzroči inaktivacijo zaviralca.Zaradi tega je stabilen pri nizkih koncentracijah DTT (manj kot 1 mM).Zaradi te lastnosti je primeren za uporabo pri reakcijah, kjer so visoke koncentracije DTT škodljive za reakcijo (npr. RT-PCR v realnem času).
Aaplikacija
Ta izdelek se lahko pogosto uporablja v vseh poskusih, kjer je možna interferenca RNaze, da se prepreči razgradnja RNA, kot so:
1. Sinteza cDNA prve verige, RT-PCR, RT-qPCR itd.;
2. Zaščita RNA pred razgradnjo pri transkripciji/prevajanju in vitro (npr. replikacija virusa in vitro);
3. Inhibicija aktivnosti RNAze med izolacijo in čiščenjem RNA.
Pogoji shranjevanja
Hraniti pri -25～-15℃;
Cikli zamrzovanja in odmrzovanja ≤ 5-krat;
Veljavnost 1 leto.
Definicija enote
Ena enota je opredeljena kot količina zaviralca RNaze, ki je potrebna za zaviranje aktivnosti 5 ng RNaze A za 50 %.
Molekularna teža
Inhibitor RNaze (brez glicerola) je 50 kDa protein.
Kontrola kakovosti
Eksonukleaza dejavnost:
Inkubacija 40 U encima z 1 μg λ-Hind III prebavljene DNA 16 ur pri 37 °C ni povzročila zaznavne razgradnje DNA, kot je bilo ugotovljeno z gelsko elektroforezo.
Aktivnost endonukleaze:
Inkubacija 40 U encima z 1 μg λ DNA 16 ur pri 37 °C ni povzročila zaznavne razgradnje DNA, kot je bilo ugotovljeno z gelsko elektroforezo.
Zarezovanje dejavnost:
Inkubacija 40 U encima z 1 μg pBR322 16 ur pri 37 °C ni povzročila zaznavne razgradnje DNA, kot je bilo ugotovljeno z gelsko elektroforezo.
RNaza dejavnost:
Inkubacija 40 U encima z 1,6 μg MS2 RNA 4 ure pri 37 ℃ ni povzročila nobene zaznavne razgradnje RNA, kot je bilo ugotovljeno z gelsko elektroforezo.
E.coli DNK:
TaqMan qPCR zazna 40 U encima.E.coli DNA je ≤ 0,1 pg/40U.
Notes
1. Ne stresajte in ne mešajte močno, da preprečite inaktivacijo encima.
2. Zaviralec RNaze je aktiven pri temperaturah od 25 ℃ do 55 ℃ in se inaktivira pri ≥65 ℃.
3. Aktivnost RNaze H, RNaze 1 in RNaze T1 ni zavirana.
4. Razpon pH za zaviranje aktivnosti RNaze je širok (aktiven pri pH 5-9), največja aktivnost pa je pri pH 7-8.
