Divja Taq DNA polimeraza
Taq DNA polimeraza je termostabilna DNA polimeraza iz Thermus aquaticus YT-1, ki ima 5′→3′ polimerazno aktivnost in 5´ flap endonukleazno aktivnost.
Komponente
| Komponenta | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq pufer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA polimeraza (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Pogoj shranjevanja
Prevoz pod 0°C in skladiščenje pri -25°C~-15°C.
Definicija enote
Ena enota je definirana kot količina encima, ki vključi 15 nmol dNTP v material, netopen v kislini, v 30 minutah pri 75 °C.
Kontrola kakovosti
1.Test čistosti beljakovin (SDS-PAGE):Čistost Taq DNA polimeraze je bila ≥95 % določena z analizo SDS-PAGE.
2.Endonuclease aktivnost:Najmanj 5 U Taq DNA polimeraze z 1 μg λDNA 16 ur pri 37 ℃ ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
3.Aktivnost eksonukleaze:Najmanj 5 U Taq DNA polimeraze z 1 μg λ -Hind Ⅲ prebavljive DNA 16 ur pri 37 ℃ ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
4.Dejavnost Nickase:Najmanj 5 U Taq DNA polimeraze z 1 μg pBR322 DNA 16 ur pri 37 °C ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
5.Aktivnost RNaze:Najmanj 5 U Taq DNA polimeraze z 1,6 μg MS2 RNA 16 ur pri 37 °C ne povzroči zaznavne razgradnje, kot je bilo ugotovljeno.
6.E. coliDNK:5 U Taq DNA polimeraze pregledamo na prisotnost genomske DNA E. coli z uporabo TaqMan qPCR s primerji, specifičnimi za lokus 16S rRNA E. coli.Kontaminacija genomske DNK E. coli je ≤1 kopija.
7.PCR pomnoževanje (5,0 kb Lambda DNA)- Reakcija 50 µL, ki vsebuje 5 ng Lambda DNA s 5 enotami Taq DNA polimeraze za 25 ciklov pomnoževanja PCR, povzroči pričakovan produkt velikosti 5,0 kb.
Nastavitev reakcije
| Komponente | Glasnost |
| Šablona DNKa | neobvezno |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM obratni primer | 1 μL |
| dNTP mešanica (po 10 mM) | 1 μL |
| 10×Taq medpomnilnik | 5 μL |
| Taq DNA polimerazab | 0,25 μL |
| Voda brez nukleaze | Do 50 μl |
Opombe:
1) Optimalna reakcijska koncentracija različnih predlog je različna.Naslednja tabela prikazuje priporočeno uporabo predloge 50 µL reakcijskega sistema.
| DNK | Znesek |
| Genomski | 1 ng-1 μg |
| Plazmid ali virus | 1 pg-1 ng |
2) Optimalna koncentracija Taq DNA polimeraze se lahko giblje od 0,25 µL~1 µL v specializiranih aplikacijah.
ReakcijaProgram
| korak | Temperatura(°C) | Čas | Cikli |
| Začetna denaturacijaa | 95 ℃ | 5 minut | - |
| Denaturacija | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ciklov |
| Žarjenjeb | 60 ℃ | 15 s | |
| Razširitev | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Končni podaljšek | 72 ℃ | 5 minut | - |
Opombe:
1) Začetni pogoj denaturacije je primeren za večino reakcij pomnoževanja in ga je mogoče spremeniti glede na kompleksnost strukture predloge.Če je struktura predloge zapletena, se lahko čas preddenaturacije podaljša na 5–10 minut, da se izboljša začetni učinek denaturacije.
2) Temperaturo žarjenja je treba prilagoditi glede na vrednost Tm temeljnega premaza, ki je običajno nastavljena na 3~5 ℃ nižjo od vrednosti Tm primerja;Za kompleksne predloge je treba prilagoditi temperaturo žarjenja in podaljšati čas podaljšanja, da dosežemo učinkovito ojačanje.
